Изучение численности отдельных физиологических групп почвенных микроорганизмов в зависимости от антропогенной нагрузки

2. Посев. С полученных разведений исследуемых образцов производится посев глубинным способом. При глубинном посеве точно измеренный объём (1,0 мл) разведения вносят стерильной пипеткой в 2–4 стерильные чашки Петри. Затем заливают чашки 15–20 мл расплавленной и остуженной до 48 – 50°С питательной средой. Когда среда застывает, чашки Петри в перевернутом виде заворачивают в бумагу и помещают в те

рмостат (28°С).

3. Подсчет выросших колоний. Колонии микроорганизмов в зависимости от скорости роста подсчитывают через 2 – 15 суток инкубации. Подсчет проводят не открывая чашек Петри.

Чашечный метод Коха использовали для подсчета численности сапротрофов и азотфиксаторов.

2.2.2 Определение количества клеток высевом в жидкие среды

1. Приготовление разведений (см. п. 3.2.1.).

2. Посев в жидкую среду и регистрация результатов. Среду предварительно разливают в пробирки и стерилизуют. Посев производят из тех же разведений, что и в чашечном методе, т.е. с 10-3 до 10-10. На каждое разведение готовилось две параллельные пробирки. Количество посевного материала везде одинаково и составляет 1 мл. Засеянные пробирки помещают в термостат. Время инкубации колеблется 7- 28 сут. Наиболее вероятное количество клеток в единице объёма рассчитывают по таблице Мак-Креди [13], разработанной на основании методов вариационной статистики. Метод предельных разведений использовали для подсчета численности бродильных бактерий, сульфат- и железоредукторов.

2.2.3 Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида)

Метод широко используется для определения численности микроорганизмов в различных естественных субстратах – почве, загрязненных водах, молоке и т.п. [13]. Хорошо обезжиренное предметное стекло помещают на миллиметровую бумагу, на которой отмечен прямоугольник площадью 1 см2. Затем на стекло из микропипетки наносят точно измеренный объем исследуемой суспензии (в нашем случае – почвенная суспензия в разведении 10-3). Нанесенную суспензию равномерно распределяют петлей на отмеченном 1 см2, препарат подсушивают на воздухе, фиксируют в пламени горелки и окрашивают. Количество клеток подсчитывают с иммерсионным объективом в квадратах окулярной сетки. Количество клеток микроорганизмов, содержащихся в 1 мл исследуемого субстрата, вычисляют по формуле:

М= (aS/sV)´n,

где М – количество клеток в 1 мл исследуемого субстрата, а – среднее число клеток в квадрате окулярной сетки, s – площадь квадрата окулярной сетки (мкм2), V – объем нанесенной на стекло суспензии в мл, S – площадь приготовленного мазка (мкм2), n – разведение исследуемого субстрата. Метод Виноградского-Брида использовали для подсчета общей численности бактерий в почве[4].

2.2 Среды и условия культивирования

Для подсчета численности сапротрофов использовали среду РПА, анаэробов – МПБ, азотфиксаторов – безазотную среду Эшби, сульфатредукторов – среду Баарса, железоредукторов – среду Лавли; маслянокислыех – МПБ с добавлением 3-5 % глюкозы [13]. Культивирование микроорганизмов осуществлялось в термостате при температуре + 280 С.

3. Результаты и их обсуждение

В процессе работы с образцами серых лесных легкосуглинистых почв (S101, S102 и S103) и чернозема выщелоченного (S41, S42, и S44) нами были получены данные по общей численности бактерий и по численности некоторых физиологических групп бактерий, результаты представлены в табл. 2. и в Приложении 1.

Таблица 2

Данные по общей численности и численности исследованных физиологических групп в почвенных образцах серой лесной легкосуглинистой почвы и чернозема выщелоченного

 Скачать реферат