Практикум по методам биохимических исследований

Содержание дисциплины

1. Введение

История развития методов биохимических исследований. Роль методического обеспечения в развитии биохимии. Классификация методов исследования в биохимии. Применение биохимических методов в медицине, биотехнологии, экологии и др. отраслях

2. Методы препаративной химии и биохимии

Особенности биологических ма

кромолекул как объектов исследования: высокая молекулярная масса, денатурация, полиэлектролитная природа, низкая скорость диффузии.

Оборудование биохимической лаборатории, специальные материалы и реактивы. Отделение осадков и нерастворимых веществ. Центрифугирование. Ультрафильтрация. Некоторые приемы, используемые при работе с белковыми растворами. Диализ.

Разделение белков путем осаждения. Общие положения. Растворимость белков при низкой концентрации солей. Высаливание при высокой концентрации соли. Осаждение белков органическими растворителями. Осаждение белков органическими полимерами и другими веществами. Осаждение вследствие избирательной денатурации. Осаждение нуклеиновых кислот. Кристаллизация белков.

3. Методы выделения органелл

Приготовление экстракта. Исходный материал. Особенности различных видов живых организмов в качестве исходного материала биохимических исследований. Свежесть сырья и его хранение.

Разрушение клеток и экстракция. Способы разрушения клеток. Растворы, используемые для экстракции. Буферные растворы и специальные добавки. Оптимизация и осветление экстракта. Особенности приготовления экстрактов растительных тканей и микроорганизмов.

Методы, используемые при очистке белков, ассоциированных с частицами. Детергенты и их применение.

4. Методы дифференциального центрифугирования

Центрифуга, ее устройство. Силы, действующие на частицу в роторе центрифуги. Скорость осаждения частиц. Константа седиментации. Раздельное осаждение частиц. Дифференциальное центрифугирование. Центрифугирование в градиенте плотности. Методы получения ступенчатых и непрерывных градиентов плотности.

5. Хроматография

5.1. Классификация и элементы теории хроматографии

Классификация хроматографических методов. Классификация по принципу фракционирования. Классификация по способу элюции. Классификация по расположению неподвижной фазы.

Элементы теории хроматографической элюции. Хроматографический процесс. Хроматографическая зона. Концепция теоретических тарелок. Кинетическая теория хроматографии. Разрешение близко мигрирующих зон. Оптимизация условий фракционирования. Градиентная элюция. Хроматография макромолекул.

6. Методы количественного определения биомолекул

Список основной литературы

1. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.

2. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука, 1983.

3. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: электрофорез и центрифугирование. М.: Наука, 1981.

4. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М.: МЦНМО, 2002.

5. Практикум по биохимии. Под редакцией С.Е. Северина и Г.А.Соловьёвой. М.: Издательство МГУ, 1989.

Список дополнительной литературы

1. Аффинная хроматография: Методы. Под ред. П.Дин, У.Джонсона, Ф.Мидл. М.: Мир, 1988.

2. Гекселер К., Экштайн Э. Аналитические и препаративные лабораторные методы. М.: Химия, 1994.

3. Гааль, Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982.

Требования к уровню освоения программы

В результате изучения данной дисциплины студент должен:

знать основные методы и методические приемы, использующиеся в современных исследованиях а области биохимии и молекулярной биологии.

уметь применять приемы работы с биологическим материалом.

владеть приемами и навыками работы с современным биохимическим оборудованием.

Перечень вопросов к зачету

Получение субклеточных фракций

Определение активности катепсина Д.

Флюориметрическое определение активности ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы (ФМСФ-КП).

Определение ММ гемоглобина методом гель-фильтрации.

Тонкослойная хроматография аминокислот.

Определение белка в пробах

Очистка диализом.

Разделение жирных кислот на бумаге.

Частичная очистка ФМСФ-КП из мозга крыс методом ионообменной хроматографии (на КМ-целлюлозе).

Высаливание белков.

Лиофилизирование биоматериала.

Ферментный электрод, строение, применение.

Современные биохимические анализаторы.

Полимеразная цепная реакция.

Сведения о переутверждении программы на очередной учебный год и регистрации изменений

 Скачать реферат